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提高萝卜杂交结实率的方法

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提高 萝卜 杂交 结实 方法
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1、照3 1的定植比例定植于 亲本繁殖棚, 初花期放蜜蜂2匹, 繁殖亲本, 并于当年秋季进行纯度鉴定。 持系进行选择, 分别选 出S单元型为S-38的不育系90株, S单元型为S-38的保持系30株, 按1的单 株分别为2和98。 0036 2015年12月利用分子标记对 “京红3号” 母本不育系及其保- 38的单株占15.5, S单元型为S-11的单株占84.5, 保持系中S单元型为S-38和S-1LP标 记进行亲和单株筛选。 如图2所示, 父本的S单元型全部为S-11, 母本不育系中S单元型为S 0035 分别取 “京红3号” 父本、 不育系(母本)及其保持系各300株, 利用上述PCR-RF。

2、GCT-3 )。 根据此位点的变异开发PCR- RFLP标记用于 “京红3号” 杂交亲和单株的筛选。1与S-38单元型SRK基因存在9个碱基 的差异, 且包含多态性Taqa I内切酶酶切位点(5 -A-38单元型多态性标记的开发与辅助选择 0034 如图4所示, 经DNAMAN软件比对发现上述S-1对结果, 认定为新的S单元型, 命名为S-38(序列表序列4)。 0033 实施例2、 S-11和S本系和制种田杂交不亲和单株的S单元型为S-11(序列表序列3), 杂交亲和单 株的S单元型没有获得比 /www.ncbi.nlm.nih.gov/)进行Blast在线比对, 结果发现 “京红3号” 父。

3、受态细胞中, 获得SRK基因单克隆片段, 并进行基因测序。 0032 (4)利用NCBI(http:凝胶DNA回收试剂盒对上述PCR产物进行纯化后, 连接到pMD18-T载 体上, 并转化到大肠杆菌感, 72延伸1.5min, 35个循环; 72延伸10min; 4保存。 0031 (3)利用琼脂糖至30 l。 0030 PCR扩增程序为: 94预变性4min; 94变性30s, 60退火1minM), 上述上下游引物(10 M)各0.6 l, 0.3 l Taq酶(5U/ l), 加ddH2O 包含100ng基因组DNA, 3 l 10PCR Buffer, 2.4 l dNTPs(2.5m。

4、3 ; 下游引物5 -TTACCGGGCATCGATGACTGA-3 。 0029 PCR反应体系:比 对根据保守序列设计特异扩增引物 , 上游序列5- AGGCTTCAGCATATAAACCTTG-4533 说明书 2/3 页 4 CN 107466844 A 4 AY534543) , 通过序列(2)引物来源: 利用NCBI公布的部分SRK基因序列(AY052579AY052585; AY53、 杂交亲和单株、 杂交不亲和 单株。 取萝 卜幼嫩叶片采用CTAB法提取基因组DNA。 0028 必要对其双亲的S 单元型进行鉴定。 0027 (1)供试体材料包括来自 “京红3号” 制种田的父本系。

5、推广应用。 分析认为可能是由于 双亲含有相同的S单元型造成了杂交不亲和, 引起杂交结实率低, 因此有有约20的母本单株结实正常(亲和单 株), 亩产量20公斤左右(图1), 制种成本高, 制约其进一步 抗病性强、 熟食品质佳等优点, 适于华北、 东北地区 秋季种植。 该品种利用雄性不育系制种制种田仅农林科学院蔬菜研究中心育成的红皮系列萝 卜新品种之一, 具 有肉质根皮色鲜红、 肉色白, 根形圆正、业途径获得。 0025 实施例1、“京红3号” 双亲S单元型的鉴定 0026 “京红3号” 是北京市明内容有整 体和充分的了解。 0024 下述实施例中所用的材料、 试剂等, 若无特殊说明, 均可从商。

6、列比对结果。 具体实施方式 0023 下面结合附图及具体实施方式对本发明做进一步说明, 以使公众对发号” 母本中具有不同S单元型单株的结实情况。 0022 图4、 S-11和S-38单元型SRK基因序 0020 图2、“京红3号” 母本和父本单株S单元型类型及分子标记鉴定。 0021 图3、“京红3推广应用。 附图说明 0019 图1、“京红3号” 萝 卜杂交制种田中亲和单株与不亲和单株结实情况。的萝 卜杂交结实率低问题。 本发明能够显著提高萝 卜杂交制种产量, 降低制种 成本, 有利于新品种的论, 利用分子标记技术在制种亲本中筛选具有不同S单元型的亲和单株并扩繁, 用于解决因双 亲不亲和引起。

7、明的有益效果: 0018 本发明公开了一种提高萝 卜杂交结实率的方法。 本发明基于萝 卜自交不亲和理样的方法对自交代数 较低的亲本进行鉴定和选择; 也可以对父本材料进行鉴定选择和改造。 0017 本发母本按合适比例定植且授粉蜂源充足。 0016 所述杂交制种田中未发现结实率高的亲和单株, 可以利用同间 真实性、 一致性鉴定, 去除杂株, 避免扩繁时引起亲本生物学混杂。 所述杂交种生产, 应保证 父、 SNP标记。 0015 所述亲和单株筛选并扩繁, 应包含利用分子标记进行单株筛选后, 进行材料田序列多态性设计的, 操作简单、 可用于大规模 样品检测的分子标记类型, 包括但不限于PCR-RFLP。

8、5 -TTACCGGGCATCGATGACTGA-3 。 0014 所述分子标记是根据双亲不同S基因和S基因扩增特异引物为上游序列5 -AGGCTTCAGCATATAAACCTTG- 3 ; 下游引物鉴定方法包括: 基因组DNA提取; PCR扩增; 基因克隆与测序; 序 列比对; 其中萝 卜自交不亲单株应为结实率极显著高于其他不亲和单株, 与常规萝 卜杂交结实率相近。 0013 所述S单元型鉴定的 107466844 A 3 定植比例种植, 生产杂交种。 0012 所述杂交制种田中结实率高的亲和种生产: 利用步骤(4)扩繁获得的新的杂交制种母本和父本, 按照合适的 说明书 1/3 页 3 CN。

9、在亲本中筛选具有上述 杂交亲和单株S单元型的植株并扩繁, 获得新的杂交制种本。 0011 (5)杂交单元型间的多态性分子标 记。 0010 (4)亲和单株筛选并扩繁: 利用步骤(3)开发的分子标记, 亲和单株和父本 的S单元型。 0009 (3)分子标记开发: 根据步骤(2)的鉴定结果, 开发不同S的单株为杂交不亲和单株。 0008 (2)S单元型鉴定: 分别鉴定杂交制种田中杂交亲和单株、 杂交不交制种田观察: 在杂交制种田调查单株结实的差异, 其中结实率高的单株为 杂交亲和单株, 杂交结实率低好的可操作性和应用价值。 0006 一种提高萝 卜杂交结实率的方法, 步骤如下: 0007 (1)杂。

10、供一种提高萝 卜杂交结实率的新方法, 便于解决因萝 卜双亲不亲和引起的 杂交结实率低的问题, 具有较, 这为利用基因测序技术鉴定萝 卜材料的S单元型提供了可靠的理论依据。 发明内容 0005 本发明提基因序列的多样性分析, 同时陆续公布了S单元型的基因序列信息(目前为止, 在NCBI上共 有41个)发展, 对萝 卜S基因研究工作逐渐深入, 主要集中在S单元型中SLG、 SRK、 SCR/SP11 者株间杂交, 通过调查授粉花数和结籽数来测定自交或杂交亲和与否。 随着分了生物学、 生 物信息学的具有重要的指导意 义。 传统的自交不亲和性的鉴定方法是亲和指数法。 它是通过在田间进行花期人工自交或 。

11、卜 中鉴定了约40个S单元型。 0004 在实际育种中, 了解每份材料的S单元型信息对配制杂交组合 一个 “S单元型” 。 到目前为止, 在萝 卜属和芸薹属中约有100多个S单元型被鉴定, 在栽培萝富 含半胱氨酸蛋白基因(SCR/SP11), 分别编码雌、 雄不亲和决定因子, 每一个S位点又被称为3 类参与SI识别反应的基因, 即S位点糖蛋白基因(SLG)、 S位点受体激酶基因(SRK)和S位点的自交不亲和体系 属于孢子体自交不亲和, 遗传上由一个具有复等位基因的高度多态性的S位点控制, 包含在高等植物中广泛存在, 是植 物预防近亲繁殖、 防止自交衰退和保持遗传多样性的重要遗传机制。 萝 卜问。

12、题变得十分迫切。 0003 植物的自交不亲和性(Self-incompatibility, SI)带有相同的S单元型, 从而导致不亲和反应的发生。 因此如何解决因自交不亲和引起的萝 卜杂交结实率低的, 两个优良材料在配制一代杂种过程中有时会出现花期杂交结实 率低的现象, 其主要原因是两个萝 卜材料杂种优势。 自交不亲和系和雄性不育系是萝 卜杂交制种及利用杂种优势的重要途 径。 但在实际育种过程中02 萝 卜是重要的十字花科蔬菜作物, 在全世界各地广泛栽培。 萝 卜是异花授粉作物, 具 有明显的域 0001 本发明涉及一种提高萝 卜杂交结实率的方法, 属于分子植物育种技术领域。 背景技术 00权。

13、利要求书 1/1 页 2 CN 107466844 A 2 一种提高萝 卜杂交结实率的方法 技术领。 6.根据权利要求1所述的方法, 所述杂交种生产过程应父母本按比例合适定植、 且授粉 蜂源充足。 子标记进行单株筛选后应进行材料田间 真实性、 一致性鉴定, 去除杂株, 避免扩繁时引起亲本生物学混杂所述亲和单株筛选并扩繁过程中, 鉴定群体大小应根据 步骤(1)中杂交亲和单株出现的比例确定。 利用分检测的分子标记类型, 包括但不限于PCR-RFLP、 SNP标记。 5.根据权利要求1所述的方法, 求1所述的方法, 所述分子标记是根据双亲不同S基因序列多态性设计 的, 操作简单、 可用于大规模样品A。

14、CCTTG-3 ; 下游引物5-TTACCGGGCATCGATGACTGA-3 。 4.根据权利要序列比对。 其中萝 卜自交不亲和S基因扩增特异引物为: 上游序列5-AGGCTTCAGCATATAA述的方法, 所述S单元型鉴定的鉴定方法包括: 基因组DNA提取; PCR 扩增; 基因克隆与测序; 的亲和单株应为结实率极 显著高于其他不亲和单株, 与常规萝 卜杂交结实率相近。 3.根据权利要求1所 按照合适的定植 比例种植, 生产杂交种。 2.根据权利要求1所述的方法, 所述杂交制种田中结实率高扩繁, 获得新的杂交制种亲本。 (5)杂交种生产: 利用步骤(4)扩繁获得的新的杂交制种母本和父本,单。

15、株筛选并扩繁: 利用步骤(3)开发的分子标记, 在亲本中筛选具有上述杂交 亲和单株S单元型的植株并 (3)分子标记开发: 根据步骤(2)的鉴定结果, 开发不同S单元型间的多态性分子标记。 (4)亲和单株。 (2)S单元型鉴定: 分别鉴定杂交制种田中杂交亲和单株、 杂交不亲和单株和父本的S单 元型。杂交制种田调查单株结实的差异, 其中结实率高的单株为杂交 亲和单株, 杂交结实率低的单株为杂交不亲和107466844 A 1.一种提高萝 卜杂交结实率的方法, 步骤如下: (1)杂交制种田观察: 在书1页 说明书3页 序列表4页 附图3页 CN 107466844 A 2017.12.15 CN 交。

16、制种。 本发明能够解决双亲不亲和引 起的萝 卜杂交结实率低问题, 显著提高其制种产 量。 权利要求双亲材料进行分子标记辅助选择, 筛选获得双亲 间S单元型不一致的单株进行亲本扩繁, 扩繁亲 本用于杂成 本。 首先对双亲自交不亲和基因的S单元型进行 鉴定, 并开发不同S单元型间的分子标记, 然后对 出现杂交 结籽率低的问题, 本发明利用分子标记技术提高 双亲的亲和性, 从而提高制种产量, 降低繁种杂交结籽率的方 法。 为了解决两个综合性状均表现优良且配合力 好的萝 卜亲本材料, 在杂交制种过程中.01) (54)发明名称 一种提高萝 卜杂交结实率的方法 (57)摘要 本发明公开了一种提高萝 卜丽王庆彪 (51)Int.Cl. A01H 1/02(2006.01) A01H 1/04(2006北京市农林科学院 地址 100097 北京市海淀区彰化村50号北 京市农林科学院 (72)发明人 张(21)申请号 201710859044.3 (22)申请日 2017.09.13 (71)申请人 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日。

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