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链置换引物和细胞转录组文库构建方法

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置换 引物 细胞 转录 文库 构建 方法
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1、进一步包括下述步 骤: (G) 对去除核糖体RNA后的RNA测序。 7.根据权利要求4所述的细胞转) 对转录cDNA得到的RNA测序。 6.根据权利要求1所述的细胞转录组文库构建方法, 其特征在于,之前。 5.根据权利要求1所述的细胞转录组文库构建方法, 其特征在于, 进一步包括下述步 骤: (F中的总 RNA和片段化所述总 RNA, 以得到细胞RNA, 其中该步骤 (L) 位于该步骤 (M) 胞转录组文库构建方法, 其特征在于, 进一步包括下述步 骤: (L) 裂解细胞, 并提取细胞裂解产物聚脱氧核糖核苷酸衔接子, 其中该步骤 (M) 位于该步骤 (A) 之前。 4.根据权利要求3所述的细(。

2、M) 去除所述细胞RNA的3 末端的磷酸基团, 并在所述细胞RNA的3 末端添加腺苷酸化 DNA寡) 之后。 3.根据权利要求2所述的细胞转录组文库构建方法, 其特征在于, 进一步包括下述步 骤: T7 RNA聚合酶转录反应体系中的模版DNA和核糖体RNA, 其中该步 骤 (E) 位于该步骤 (D要求1所述的细胞RNA文库构建方法, 其特征在于, 进一步包括下述步骤: (E) 转录结束后, 去除有T7启动 子序列; 和 (D) 通过T7 RNA聚合酶转录PCR扩增得到的cDNA。 2.根据权利双链cDNA; (C) 通过PCR扩增所述双链cDNA, 其中PCR扩增所使用的扩增引物的5 末端带置。

3、换引物带有长度为4的随机序列; (B) 由所述第一链cDNA 产生相应的第二链cDNA, 从而产生的第一链cDNA, 其中逆转录RNA所使用 的链置换引物的5 末端带有多个dSpacer, 且所述链文库构建方法, 其特征在于, 包括下述步骤: (A) 逆转录细胞RNA, 以产生相应于所述细胞RNACN 111549025 A 2020.08.18 CN 111549025 A 1.一种细胞转录组复读长的影响, 且其流程简单易行, 成本低廉。 权利要求书1页 说明书32页 序列表8页 附图9页 胞全转录组文库构建方法 受转录本本身的含量影响小和能够准确反应样 品中RNA的含量而不会受到PCR重末。

4、端带有T7启动 子序列和 (D) 通过T7RNA聚合酶转录PCR扩增得 到的cDNA, 本发明单细产生 双链cDNA;(C) 通过PCR扩增所述双链cDNA, 其中 PCR扩增所使用的扩增引物的5 述链置换引物带有长度为4的随机序列;(B) 由所 述第一链cDNA产生相应的第二链cDNA, 从而NA的第一链cDNA, 其中逆转录RNA所使用 的链置换引物的5 末端带有多个dSpacer, 且所其中本发明单细胞全转录组文库构建方法 包括步骤:(A) 逆转录细胞RNA, 以产生相应于所 述细胞R称 链置换引物和细胞转录组文库构建方法 (57)摘要 本发明提供一种单细胞全转录组文库构建 方法, ) C40B 50/06(2006.01) C12Q 1/6869(2018.01) (54)发明名(51)Int.Cl. C12N 15/10(2006.01) C12N 15/11(2006.01欢孙莹璞杨运桂 张楠郭佳杨莹 (74)专利代理机构 广东广和律师事务所 44298 代理人 董前进 郑州大学第一附属医院 地址 450000 河南省郑州市二七区建设东 路1号 (72)发明人 徐家伟姚(21)申请号 202010515520.1 (22)申请日 2020.06.08 (71)申请人 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日。

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